단백질 정제
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작성일 21-10-29 11:56
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세포를 구성하는 단백질은 모두 혼재된 상태로 존재하기 때문에 이들 각각의 구조와 기능을 연구하기 위해서는 우선적으로 연구하고자 하는 단백질을 정제해야만 한다.
① 세포질에 존재하는 가용성 단백질의 추출
5) 검사소요 경비가 저렴 해야 한다.
미량의 시료로 측정(measurement) 가능한 경우와 어느 농도 이상이 되어야만 측정(measurement) 가능한 경우
조직이나 세포를 분쇄하는 과정 중에 완충액을 혼합해 단백질을 녹게 만든다.
1) 단백질정제의 목적
단백질을 정제하기 위해서는 몇 시간 ~ 주가 소요되는 데 그 동안 단백질의 안정화를 위한 조치를 하지 않으면 단백질들이 활성을 상실할 수 있다.
6) 단백질의 분리수단
7) 정제된 단백질의 순도 확
단백질 정제
1) 가능한 최고의 회수율
3) 단백질의 안정화
1) 정제 하고자 하는 단백질만을 선택적으로 측정(measurement), 즉 특이성을 고려
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2) 민감도 고려
① 친화성 크로마토그래피 ② 겔여과 크로마토그래피
4) 검사법이 편하고, 간편한 장비만 있어도 시행할 수 있어야 한다. 단백질의 구조는 pH에 의하여 많은 影響을 받으므로 세포를 분쇄하는 과정에서부터 고려해야 한다.
① 조분획 ② 한외여과
1) 단백질정제의 목적 2) 단백질 정제 시 고려사항 3) 단백질의 안정화 4) 단백질의 추출 ① 세포질에 존재하는 가용성 단백질의 추출 ② 세포막에 존재하는 막 단백질의 가용화와 추출 5) 단백질의 분획 ① 조분획 ② 한외여과 6) 단백질의 분리수단 ① 친화성 크로마토그래피 ② 겔여과 크로마토그래피 ③ 이온교환 크로마토그래피 ④ FPLC 7) 정제된 단백질의 순도 확
2) 최고의 생물학적 활성유지
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3) 최고의 순도
단백질의 활성을 유지하고 안정화시키기 위해서는 다음과 같은 사항을 고려해야 한다.
4) 단백질의 추출
③ 이온교환 크로마토그래피 ④ FPLC
5) 단백질의 분획
로 나뉠 수 있다.
3) 재현성 고려
측정(measurement)법에 따라 비슷한 구조와 기능을 하는 단백질들을 모두 검색하는 법이 있고,
설명
1) pH
2) 단백질 정제 시 고려사항
단백질 정제,단백질
② 세포막에 존재하는 막 단백질의 가용화와 추출
로 얻는 것이다.
다. 민감도에 따라 시료의 농도를 생각하여 정제 해야 한다.
순서
정제의 기본은, 생리활성이나 기능을 지닌 목적 단백질을
원하는 단백질만을 검색하는 검사법이 있다.
같은 시료를 때와 장소, 측정(measurement)하는 사람이 다르더라도 같은 수치가 나와야 한다.
